本发明公开了一种冷榨生产脱酚棉籽蛋白的方法，包括如下步骤：1)棉籽清理和调质：棉籽去除杂质后，调节水分至8％～12％；2)整粒棉籽冷榨：调质后的棉籽不脱壳直接用双螺杆压榨机进行整籽压榨，经过滤后得到毛棉油和冷榨棉籽饼；毛棉油经精炼后得精制棉油；3)冷榨棉籽饼粉碎分级：将棉籽饼粉碎过80目～150目筛；4)分级冷榨棉籽饼亚临界萃取：取过80目～150目筛的筛上物和筛下物分别进行亚临界萃取，提取其中残余油脂后即得到低变性的脱酚棉籽蛋白。本发明棉籽不经破壳处理直接整粒冷榨，不仅出油率高，而且精简了工序、节省了能耗，制得的脱酚棉籽蛋白中棉酚含量低，蛋白质含量高、变性低。