本发明公开了用于饲料中添加的干酪乳杆菌的快速定性、定量检测试剂盒及检测方法和应用，通过对已经报道的干酪乳杆菌基因组序列的比对分析，本发明提供了用于干酪乳杆菌定性定量检测的引物5’‑ TGCGGCGGTAAAGGTTG ‑3’、5’‑ CGTCTGTGTAGAAACTGCGAATG ‑3’，同时本发明提供了一种饲料样品的预处理方法，使得饲料中的益生菌可以充分释放，准确真实的反应出饲料中的益生菌数目。本发明可以在不进行益生菌纯培养的基础上，简便、快速、准确地定性、定量检测猪饲料中干酪乳杆菌，检测程序简单、检测效率高、准确性好，灵敏度高，重复性好。