本发明公开一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法及基因载体，涉及基因载体技术领域。所述聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁的制备方法包括以下步骤：在惰性气氛下，向米糠多糖铁溶液中依次加入三乙胺和N,N‑羰基‑二咪唑溶液，避光反应形成反应溶液；将聚乙烯亚胺溶液加入到所述反应溶液中避光反应形成粗样液，并在反应过程中控制混合溶液呈碱性；对所述粗样液进行透析，取透过液醇沉、冷冻干燥后得聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁。本发明还提出一种基因载体，包括聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁。本发明旨在制备一种聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁，制备工艺简单、制备成本低，且制得的聚乙烯亚胺接枝米糠多糖铁具有较低的细胞毒性和高转染效率。