本发明属于天然产物提取技术领域，涉及一种抑制癌细胞增殖的芡实壳提取物及其制备方法和应用。该制备包括以下步骤：i)芡实壳粉末经超声波提取器进行超声提取，得到提取液；ii)将步骤i)得到的提取液进行硅胶柱层析纯化、加热浓缩和冷冻干燥，制得所述芡实壳提取物。本发明的芡实壳提取物具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用，在开发天然的防癌、抗癌保健食品方面具有很好的应用前景。