本发明提供一种斑鸠菊抗肿瘤活性有效部位提取物制备方法，该方法包括以下工艺步骤：取烘干的斑鸠菊全株为原料，干燥粉碎后，加入7‑10倍的60‑95%的乙醇搅拌加热50‑60℃回流提取1.5小时，固液分离，收集滤液，药渣中进一步加入8倍量60‑95%的乙醇；搅拌加热50‑60℃回流提取1.5小时，固液分离，收集滤液；合并滤液，减压浓缩除去乙醇，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层浓缩得浸膏；乙酸乙酯部位经MCI gel树脂柱分离，分别以40%、80%、95%乙醇7‑9BV洗脱，分别收集洗脱液、浓缩干燥，分别获得组分A、组分B、组分C，经实验证实，其中组分B具有明显的抗肿瘤作用，可以用于制备抗肿瘤药物。