本发明涉及支原体的分离，公开了一种高效分离猪肺炎支原体的方法。本发明高效分离猪肺炎支原体的方法为使用含左氧氟沙星的培养基对猪肺炎支原体进行纯化培养，其中左氧氟沙星的浓度为50‑200μg/mL。本发明发现了左氧氟沙星在一定浓度范围内能明显抑制了猪鼻支原体的生长而不影响猪肺支原体的生长，可用含左氧氟沙星的培养基对猪肺支原体进行纯化、减少猪鼻支原体的污染。通过本发明发方法分离猪肺炎支原体的效率可以达到50％左右，远远高于传统方法分离纯化方法。